尘埃粒子计数器知识大合集

关于微生物的作用和生存环境

作用：

√食物链√物质链

√食品工业√生态群落 

√制药工业（疫苗、抗生素）.......

生存环境：

√土壤，空气，水体 

→某些恶劣条件

-海底 

-死海 

-撒哈拉沙漠 

-极地(—88℃)

-火山口的温泉(+98℃)

-原油矿床

√微生物几乎无处不在

关于微生物限度检测

   初始污染菌：产品消毒、灭菌前的细菌总数，可判断检品售细菌污染的程度以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、生产人员的卫生状况，是对检品进行卫生学评价的综合依据。

关于微生物计数法

 检查非规定灭菌产品售微生物污染程度的方法

 微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

 当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合规定的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。除另有规定外，本法不适用于活菌制剂的检查。

 计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法（Most-Probable-Number Method,简称MPN法）。MPN法用于微生物计数法时精确度较差，但对于某些微生物污染量很小的供试品，MPN法可能是更适合的方法。

 供试品检查时，应根据供试品理化特性和微生物限度标准等因素选择计数方法，检测的样品量应尽能保证所获得的试验结果能够判断供试品是否符合规定。所选方法的适应性须经确认。            

关于初始污染菌检测有哪些？

环 境：微生物计数试验环境应符合微生物限度检查的要求。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。洁净空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。（参考无菌检查法对环境的要求）

设 备：微生物限度仪（微生物过滤装置）、菌落计数器（如需要）

试   剂：冲洗液等同无菌检查法。

培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基（TSA）

           沙氏葡萄糖   

           琼脂培养基（SDA）

菌   株：金黄色葡萄球菌CCMCC(B)26003   

           铜绿假单胞菌CMCC(B)10104

         枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501     

         白色念珠菌CMCC(F)98001

    黑曲霉CMCC(F)98003             

    大肠埃希菌CMCC(B)44102

关于供试液制备原则

根据供试品的理化特性与生物特性，采取适宜的方法制备供试液。供试液制备若需加温时，应均匀加热，契温度不应超过45℃。供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。样品浸提时，所用缓冲液应没过样品顶端，使得样品被*浸没。

关于常用供试液制备方法

（如果下列供试液制备方法经确认均不适用，应建立其他适宜的方法）

（1）水溶性供试品：

取供试品，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养提液基溶解或稀释制成1：10供试液。若需要，调节供试液PH值至6-8.必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。水溶性液体制剂也可用混合的供试品原液作为供试液。

（2）水不溶性非油脂类供试品：

取供试品，用PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基制备成1：10供试液。分散力较差的供试品，可在稀释液中加入表面活性剂如0.1%（ml/ml）的聚山梨酯80，使供试品分散均匀。若需要，调节供试液PH值至6-8.必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

（3）油脂类供试品：

取供试品，加入无菌十四烷酸异丙酯使得=溶解，或与少量并能使供试品乳化的无菌聚山梨酯80或其他无抑菌性的无菌表面活性剂充分混匀。表面活性剂的温度一般不超过40℃（特殊情况下，最多不超过45℃），小心混合，若需要可在水浴中进行，然后加入预热的稀释液使成1：10供试液，保温，混合，并在最短时间内形成乳状液。必要时，用稀释液或含上述表面活性剂的稀释液进一步10倍系列稀释。

（4）膜剂供试品：

取供试品，剪碎，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，或PH7.2磷酸盐缓冲液，或胰酪大豆胨液体培养基，浸泡，振摇，制成1：10的供试液。若需要，调节供试液PH值至6-8.必要时，用同一稀释液将供试液进一步10倍系列稀释。

关于抗菌活性的去除或灭活

 供试液接种后，按下列“微生物回收"规定的方法进行微生物计数。若试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值小于菌液对照组菌落数值的50%，可采用下述方法消除供试品的抑菌活性。

（1）增加稀释液或培养基体积

（2）加入适宜的中和剂或灭活剂

（3）采用薄膜过滤法

（4）上述几种方法的联合适用

若没有适宜消除供试品抑菌活性的方法，对特定试验菌回收的失败，表明供试品对该试验菌具有较强抗菌活性，同时也表明供试品不易被该类微生物污染。但是，供试品也可能仅对特定试验菌株具有抑制作用，而对其他菌没有抑制作用。因此，根据供试品须符合的微生物限度标准和菌数报告规则，在不影响检验结果判断的前提下，应采用能使微生物生长的更高稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。若方法适用性试验符合要求，应以该稀释级供试液作为低稀释级的供试液进行供试品检查。

关于微生物限度检测--供试品监检查--平皿法

 平皿法包括倾注法和涂布法。除另有规定外，取规定量供试品，按方法适用性试验确认的方法进行供试液制备和菌数测定，每稀释级每种培养基至少制备2个平板。

 培养和计数：除另有规定外,胰酪大豆胨琼脂培养基平板在30~ 35℃培养3~ 5天，沙氏葡萄糖琼脂培养基平板在20~ 25~C培养5~ 7天，观察菌落生长情况，点计平板上生长的所有菌落数，计数并报告。菌落蔓延生长成片的平板不宜计数。点计菌落数后，计算名稀释级供试液的平均菌落数，按菌数报告规则报告菌数。若同稀释级两个平板的菌落数平均值不小于15 ,则两个平板的菌落数不能相差1倍或以上。

 菌数报告规则： 需氧菌总数测定宜选取平均菌落数小于300cfu的稀释级、霉菌和酵母菌总数测定宜选取平均菌落数小于100cfu的稀释级，作为菌数报告的依据。取最高的平均菌落数，计算1g、1ml或10cm2供试品中所含的微生物数，取两位有效数字报告。

 如各稀释级的平板均无菌落生长,或仅低稀释级的平板有菌落生长但平均菌落数小于1时，以< 1乘以低稀释倍数的值报告菌数。

关于微生物限度检测--供试品检查--薄膜过滤法

  除另有规定外，按计数方法适用性试验确认的方法进行供试液制备。取相当于1g、 Iml或10cm²供试品的供试液，若供试品所含的菌数较多时，可取适宜稀释级的供试液，照方法适用性试验确认的方法加至适量稀释液中，立即过滤，冲洗，冲洗后取出滤膜，菌面朝上贴于胰酪大豆胨琼培养基或沙氏葡萄糖琼脂培养基上培养。

培养和计数：培养条件和计数方法同平皿法，每张滤膜上的菌落数应不超过100cfu。

菌数报告规则：以相当于1g、1ml或10cm²供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以< 1报告菌数（每张滤膜过滤1g、1ml或10cm²供试品)，或< 1乘以低稀释倍数的值报告菌数。

关于微生物限度检测--结果判断

  氧菌总数是指胰酪大豆胨琼脂培养基上生长的总菌落数(包括真菌菌落数)；霉菌和酵母菌总数是指沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的总菌落数(包括细菌菌落数)。若因沙氏葡萄糖琼脂培养基上生长的细菌使霉菌和酵母菌的计数结果不符合微生物限度要求,可使用含抗生素(如氯霉素、庆大霉素）的沙氏葡萄糖琼脂培养基或其他选择性培养基(如玫瑰红钠琼脂培养基）进行霉菌和酵母菌总数测定。使用选择性培养基时，应进行培养基适用性检查。若采用MPN法,测定结果为需氧菌总数。 

各品种项下规定的微生物限度标准解释如下: 

10cfu：可接受的最大菌数为20; 

100cu：可接受的最大菌数为200;

1000f：可接受的最大菌数为2000， 依此类推。 

若供试品的需氧菌总数、霉菌和酵母菌总教的检查结果均符合该品种项下的规定，判断供试品符合规定；若其中任何一项不符合该品种项下的规定，判供试品不符合规定。

关于微生物限度检测--纯化水微生物限度检测

Q:纯化水微生物限度检测方法？